von Dr. Xavier Santamaria Costa
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| [1.] Xsc/Fragment 037 04 - Diskussion Zuletzt bearbeitet: 2014-11-17 21:52:35 Hindemith | Cervello 2009, Fragment, Gesichtet, SMWFragment, Schutzlevel sysop, Verschleierung, Xsc |
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| Untersuchte Arbeit: Seite: 37, Zeilen: 4-28 |
Quelle: Cervello 2009 Seite(n): 56, 57, Zeilen: 56: 17 ss. ; 57: 1 ss. |
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| Citometría de flujo
La citometría de flujo (CMF) es una técnica de análisis celular multiparamétrico cuyo fundamento se basa en hacer pasar una suspensión de partículas (generalmente células) alineadas por delante de un haz de láser focalizado. Es una tecnología que permite la medida simultánea de múltiples características físicas de una sola célula. Estas medidas son realizadas mientras las células pasan en fila, a una velocidad de 500 a 4000 células por segundo, a través del aparato de medida en flujo laminar. Es esencial disponer de una suspensión de células o partículas individuales, de modo que la dificultad para obtenerla es un factor limitante para el empleo de la técnica. Y esto va en aumento si se desea trabajar con células vivas. Las células o partículas son marcadas por colorantes fluorescentes que son capaces de excitarse con una fuente luminosa de alta energía. La citometría de flujo se utilizó para conocer la viabilidad celular, aislar las células que expresaban insulina, conocer la pureza de la muestra y fenotipar con diferentes las célulsa madre con diferentes marcadores de superficie (apartados de resultados). La suspensión celular convenientemente procesada y teñida, se inyecta en la cámara de flujo del citómetro que está hidrodinámicamente enfocada para que las células pasen individualmente, una detrás de otra, a través de un punto en que estas interaccionan físicamente con un haz de luz monocromática, la luz al incidir sobre las células produce una dispersión en todas las direcciones. La luz dispersada hacia adelante (llamada forward scatter, FS a 0 grados) está relacionada con el tamaño celular. La luz dispersada a 90 grados del eje del haz lumínico (side scatter, SS a 90 [grados) está relacionada con la estructura interna y la complejidad citoplasmática.] |
3.2.2 Citometría de flujo.
La citometría de flujo (CMF) es una técnica de análisis celular multiparamétrico cuyo fundamento se basa en hacer pasar una suspensión de partículas (generalmente células) alineadas por delante de un haz de láser focalizado. Es una tecnología que permite la medida simultánea de múltiples características físicas de una sola célula. Estas medidas son realizadas mientras las células pasan en fila, a una velocidad de 500 a 4000 células por segundo, a través del aparato de medida en flujo laminar. Es esencial disponer de una suspensión de células o partículas individuales, de modo que la dificultad para obtenerla es un factor limitante para el empleo de la técnica. Y esto va en aumento si se desea trabajar con células vivas. Las células o partículas son marcadas por colorantes fluorescentes que son capaces de excitarse con una fuente luminosa de alta energía. La citometría de flujo se utilizó para conocer la viabilidad celular (apartado 3.2.3), aislar las células de la side population (SP, ver apartado [página 57] 3.2.5), conocer la pureza de la muestra (apartado 3.2.3), y fenotipar con diferentes marcadores tanto las suspensiones celulares de epitelio y estroma como las células SP aisladas desde estas fracciones celulares (apartados 3.5.1 y 3.5.2). La suspensión celular convenientemente procesada y teñida, se inyecta en la cámara de flujo del citómetro que está hidrodinámicamente enfocada para que las células pasen individualmente, una detrás de otra, a través de un punto en que estas interaccionan físicamente con un haz de luz monocromática, la luz al incidir sobre las células produce una dispersión en todas las direcciones. La luz dispersada hacia adelante (llamada forward scatter, FS a 0 grados) está relacionada con el tamaño celular. La luz dispersada a 90 grados del eje del haz lumínico (side scatter, SS a 90 grados) está relacionada con la estructura interna y la complejidad citoplasmática. |
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