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| Untersuchte Arbeit: Seite: 64, Zeilen: 1-27 |
Quelle: Regn 2002 Seite(n): 115, 116, Zeilen: 115: 9ff; 116: 3ff |
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| Aus frischem autologen Spenderblut isolierte PBL (ggf kryokonserviert unmittelbar vor dem Ansetzen der Kokultur aufgetaute autologe PBL) dienten als Responderzellen. Dabei wurden die Stimulatorzellen diesmal nicht bestrahlt, da die Lymphozyten innnerhalb der DC-Population im autologen System keinen Einfluß auf die Stimulationskapazität der DCs hatten. Das Verhältnis der Stimulator zu Responderzellen betrug in der der Startkultur 5x104 AdV+DCs zu 2x106 PBMNCs. Nach zehn Tagen wurde die sich entwickelnde ZTL-Kultur zum ersten Mal mit autologen AdV+DCs in einer Ratio von 4:1 (ZTL:DC) und danach noch einmal mit autologen LCLs (4:1) restimuliert [sic] wobei am Tag 17 niedrigdosiertes IL-2 (20 U/ml) dem Kulturmedium zugefügt wurde. Der Zeitpunkt und die Menge des zugefügten IL-2 waren entscheidend um das Auswachsen unspezifischer Effektorzellen zu verhindern, die sich zu Beginn in großen Mengen innerhalb der gesamten T-Zellpopulation in der Kultur aufhalten. Zu frühe Gabe von IL-2, dem für die Aktivierung und Proliferation von T-Zellen wichtigsten Wachstumsfaktor, würde selbst die Proliferation solcher Zellen bewirken, die nur die niederaffine Form des IL-2-Rezeptors exprimieren. Diese Zellen könnten dann das Expandieren der spezifischen T-Zellklone beeinträchtigen. Zur Bestimmung der spezifische Zytotoxizität diente der Standard Chromfreisetzungs Testes [sic] (chrom 51-release Assay) als Methode der Wahl (Abbildung 17)
In diesem Test wurden die Effektorzellen (ZTL) mit variierenden Zellzahlverhältnis von 51Chrommarkierten Zielzellen (Targets) für vier Stunden inkubiert. Das Verhältnis der Effektoren zu den Targets reichte dabei von 5:1, 10:1, 20:1 bis 40:1. Dendritische Zellen wurden auch als Zielzellen verwendet. Die Zielzellen, die getestet wurden [sic] waren:, [sic] Tumorzellinie GHD, HLA-mismatched DCs, autologe und allogene LCLs, sowie die T-Zellinie HSB-2, die aufgrund einer Mutation in den MHC-I-Genen von NK-Zellen erkannt und lysiert wird. |
Aus frischem autologen Spenderblut isolierte PBL (falls kryokonserviert unmittelbar vor dem Ansetzen der Kokultur aufgetaute autologe PBL) dienten als Responderzellen. Dabei wurden die Stimulatorzellen diesmal nicht bestrahlt, da die Lymphozyten innnerhalb der DC-Population im autologen System keinen Einfluß auf die Stimulationskapazität der DCs hatten. Das Verhältnis der Stimulator zu Responderzellen betrug in der der Startkultur 5x104 AdV+DCs zu 2x106 PBL. Nach zehn Tagen wurde die sich entwickelnde ZTL-Kultur zum ersten Mal mit autologen AdV+DCs in einer Ratio von 4:1 (ZTL:DC) und danach noch wöchentlich mit autologen LCLs (4:1) restimuliert [sic] wobei am Tag 17 niedrigdosiertes IL-2 (20 U/ml) dem Kulturmedium zugefügt wurde. Der Zeitpunkt und die Menge des zugefügten IL-2 waren entscheidend um das Auswachsen unspezifischer Effektorzellen zu verhindern, die sich zu Beginn in großen Mengen innerhalb der gesamten T-Zellpopulation in der Kultur aufhalten. Zu frühe Gabe von IL-2, dem für die Aktivierung und Proliferation von T-Zellen wichtigsten Wachstumsfaktor, würde selbst die Proliferation solcher Zellen bewirken, die nur die niederaffine Form des IL-2-Rezeptors exprimieren. Diese Zellen könnten dann das Expandieren der spezifischen T-Zellklone beeinträchtigen. [...]
[Seite 116] [...] In diesem Test wurden die Effektorzellen (ZTL) mit variierenden Ratios von 51Chrommarkierten Zielzellen (Targets) für vier Stunden inkubiert. Das Verhältnis der Effektoren zu den Targets reichte dabei von 5:1, 10:1, 20:1 bis 40:1. Dendritische Zellen wurden in allen Zytotoxizitätstests auch als Zielzellen verwendet. Die Reihe von Zielzellen, an denen die ZTL-Linien getestet wurden [sic] waren: AdV-infizierte autologe DCs, uninfizierte autologe DCs, HLA-mismatched uninfizierte und AdV-infizierte DCs, autologe und allogene LCLs, sowie die T-Zellinie HSB-2, die aufgrund einer Mutation in den MHC-I-Genen von NK-Zellen erkannt und lysiert wird. |
Ein Verweis auf die Quelle fehlt. |
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