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| Untersuchte Arbeit: Seite: 43, Zeilen: 1ff (komplett) |
Quelle: Regn 2002 Seite(n): 77, 78, 79, Zeilen: 77: letzter Abschnitt; 78: 1ff; 79: 1ff |
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| Die Zielzellen wurden geerntet, abzentrifugiert und in 50 μl komplettem RPMI resuspendiert und je nach Kalibrierungsdatum mit 30- 60 μl der verdünnten Natriumchromatlösung (51Cr-Isotop; 0,1 mCi am Kalibrationstag) für 60 Minuten bei 37°C im Inkubator inkubiert. Anschließend wurden die Zellen dreimal mit 5 ml komplettem RPMI gewaschen und schließlich in 1ml komplettem RPMI aufgenommen, gezählt und auf 2x104/ml eingestellt. Die so eingestellten Zielzellen wurden dann zu den wie oben beschriebenen CTLs gegeben, wobei pro CTL zu Zielzell Ratios dreier Ansätze gewählt wurden. Anschließend wurde dieser Testansatz für vier Stunden bei 37°C inkubiert. Das während dieser Zeit an das Medium abgegebene Chrom kann als ein direktes Maß für die Lyse durch die Effektorzellen bzw. für die spontane Radioaktivitätsabgabe einer jeden Zielzelle gewertet werden.
Abbildung 5 gibt einen schematischen Überblick über die experimentelle Anordnung der CTLs und ihren Zielzellen in der Platte
Abbildung 5. Schematische Anordnung einer 96-Well-Spitzbodenplatte wie sie für die Chromfreisetzungsexperimente verwendet wurde. MESSUNG DER SPEZIFISCHEN ZYTOTOXIZITÄT Nach der 4stündigen Inkubationszeit wurden 50 μl des Kulturüberstandes aus jedem Well der Testplatte in die Vertiefungen einer 96 Well Luma-Platte transferiert. Die Lumaplatte ist eine spezielle, für die Messung von Chrom entwickelte Mikrotiterplatte, die mit einer festen Szintillationssubstanz gefüllt ist, [die es dann erlaubt, die resultierende Gamma Strahlung im TOP-Counter zu messen.] |
Die Zielzellen wurden geerntet, abzentrifugiert und in 50 μl komplettem RPMI resuspendiert und je nach Kalibrierungsdatum mit 30- 60 μl der verdünnten Natriumchromatlösung (51Cr-Isotop; 0,1 mCi am Kalibrationstag) für 60 Minuten bei 37°C im Inkubator inkubiert. Anschließend wurden die Zellen dreimal mit 5 ml komplettem RPMI gewaschen und schließlich in 1ml komplettem RPMI aufgenommen, gezählt und auf 2x104/ml eingestellt. Die
[Seite 78] so eingestellten Zielzellen wurden dann zu den wie oben beschriebenen ZTL gegeben, wobei pro ZTL zu Zielzell Ratios Dreier Ansätze gewählt wurden. Anschließend wurde dieser Testansatz für vier Stunden bei 37°C inkubiert. Das während dieser Zeit an das Medium abgegebene Chrom kann als ein direktes Maß für die Lyse durch die Effektorzellen bzw. für die spontane Radioaktivitätsabgabe einer jeden Zielzelle gewertet werden. Abbildung 1 gibt einen schematischen Überblick über die experimentelle Anordnung der ZTL und ihren Zielzellen in der Platte
Abbildung 1: Schematische Anordnung einer 96-Well-Spitzbodenplatte wie sie für die Chromfreisetzungsexperimente verwendet wurde. [Seite 79] Messung der spezifischen Zytotoxizität Nach der 4stündigen Inkubationszeit wurden 50 μl des Kulturüberstandes aus jedem Well der Testplatte in die Vertiefungen einer 96 Well Luma-Platte transferiert. Die Lumaplatte ist eine spezielle, für die Messung von Chrom entwickelte Mikrotiterplatte, die mit einer festen Scintillationssubstanz gefüllt ist, die es dann erlaubt, die resultierende Gamma Strahlung im TOP-Counter zu messen. |
Ein Verweis auf die Quelle fehlt. |
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